Тело человека №102, страница 12

ПАТОЛОГИЯ: Клиническая цитогенетика Клеточные исследования

Ж*

fei ¹

f?A _ Г® / ЯЛк

По окончании культивации к выращенной культуре добавляют колхицин, подавляющий процесс клеточного деления на стадии метафазы, когда хромосомы спирализо-ваны (уплотнены) и отчетливо видны при микроскопии. Затем хромосомы исследуют с целью выявления количественных и структурных отклонений.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Цитогенетики используют ряд молекулярных методов исследования, позволяющих идентифицировать хромосомные аномалии и выяснять их природу.

Метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH)

Хромосомные аномалии

Выделяют два основных вида хромосомных аномалий: врожденные - изменения неонкологического характера; являются конституциональными. Какая-либо определенная аномалия присутствует с момента рождения и присуща всем клеткам данного индивидуума;

приобретенные - у онкологических пациентов хромосомные аномалии являются приобретенными. Изменения наблюдаются лишь в специфических клетках, связанных с заболеванием. В одной клетке может наблюдаться несколько различных хромосомных аберраций.

называемые зондами, помечают флюоресцентным красителем и добавляют к хромосомным препаратам. Они связываются (гибридизи-руют) со специфическими участками хромосом, которые можно визуализировать при облучении ультрафиолетовым светом. Локализация таких участков позволяет судить о характере аномалий.

«Роспись» хромосом Специфические для хромосом последовательности ДНК связываются с флюоресцентным красителем, который при добавлении к препарату мета-фазной пластинки связывается с соответствующей хромосомой. Это позволяет идентифицировать любую отдельно взятую хромосому.

«Обратная» гибридизация Зонды, полученные из аномальной хромосомы, аналогичным образом «окрашиваются» и добавляются к препарату метафазной пластинки с нормальными хромосомами. Это обеспечивает идентификацию хромосомного происхождения аномалии.

Сравнительная геномная гибридизация Позволяет выявить хромосомные нарушения в геноме (генетическом материале клетки) без культивации биоматериала. Геномную ДНК из клеток больного и из рефе-ренсных здоровых клеток метят флюоресцентными красителями разного цвета (например, зеленым и красным соответственно). Оба типа ДНК смешивают в равных

А Используемый в цитогенет ке метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) позволяет исследовать чрезвычайно малые участки хромосом.

количествах, а затем добавляют к контрольным мета-фазным препаратам.

Полученное изображение фиксируется с помощью электронной камеры и передается в компьютер для анализа. Для каждой хромосомы вычисляется соотношение красного и зеленого красителей. Потеря или избыток генетического материала в клетках больного определяется как усиление или ослабление зеленого свечения.

А Для выявления хромосомных аномалий цитогенетики используют метод флюоресцентной гибридизации in situ (FlSH). Флюоресцентный краситель становится заметен при облучении ультрафиолетовым светом.

Данный метод особенно эффективен для выявления хромосомных нарушений в опухолевых клетках, которые, как известно, крайне трудно поддаются культивированию.

Следующие статьи раздела «Клиническая цитогенетика» в ж)фнале «Тело человека: Снаружи и внутри»:

Лейкемия может быть связана с хромосомными аномалиями. Для уточнения типа аномалий у больного берут пробы костного мозга. Это позволяет дифференцировать различные формы лейкемии и дает возможность оценить индивидуальный прогноз пациента.

В норме клетка содержит ^^Т^ШШЪВи ТШШШШШ 0 46 хромосом. Однако в отдельных случаях возникает сбой в процессе репликации генетической информации (ДНК), что приводит к появлению клетки с избыточным или недостаточным количеством хромосом. Так возникают хромосомные аномалии, имеющие целый ряд последствий.

АНОМАЛИИ ПОЛОВЫХ ХРОМОСОМ: ЛИСТ 3

В процессе деления клеток при формировсшии яйцеклетки и сперматозоида могут возникать аномальные половые хромосомы (Х- и Y-хромосомы), что приводит к появлению ге-нетических дефектов у потомства Хромосомные нарушения могут быть как количественными (уменьшение или увеличение числа хромосом), так и структурными (патология формирования хромосом).

ОНКОГЕНЕТИКА: ЛИСТЫ 5 И 6

Причиной возникновения ало-качественных опухолей являются генные мутации, приводящие к патологическому делению клеток. Большинство га них носят случайный характер и не передаются га поколения в поколение. Од нако некоторые виды мутаций являются наследственными - например, в яйцеклетке или сперматозоидах они передаются плоду на стадии оплсуютворения.