Тело человека №116, страница 12

ПАТОЛОГИЯ: Иммунология

Иммуноферментный анализ (ИФА)

При иммуноферментном анализе (ИФА) используется фермент, который вызывает изменение цвета в растворе. Этот тест проводится для выявления аутоантител при ряде аутоиммунных заболеваний.

СЫВОРОТКА Собственные антигены наносятся на 96-луночный титра-ционный микропланшет. Сыворотка крови пациента добавляется в лунки и оставляется на один час, в течение которого происходит связывание аутоантител с собственными антигенами.

Микропланшет промывается, после чего на нем остаются только аутоантитела, а все другие антитела удаляются. Наличие аутоантител выявляется с помощью специальных вторичных антител, которые связываются с человеческими аутоантитела ми с присоединением фермента. Вторичное

антитело добавляется в каждую лунку. При последующем промывании свободные вторичные антитела удаляются.

В лунках остаются лишь антитела, связанные с человеческими аутоантителами, прореагировавшими с собственными антигенами, а также прикрепленные к ним ферменты.

ИЗМЕНЕНИЕ ЦВЕТА При добавлении вещества, вступающего во взаимодействие с ферментом, наблюдается изменение окраски, и тест считается положительным. Чем интенсивнее цвет, тем больше аутоиммунных антител присутствует в данном растворе сыворотки крови.

► При ИФА используется 96-луночный титрационный микропланшет. При изменении цвета тест считается положительным.

Вторичные антитела

Вторичные антитела используются в иммунологических тестах для обнаружения человеческих аутоантител. Они производятся путем иммунизации животных, например овец, человеческими антителами. Иммунная система овец реагирует на это путем образования овечьих антител против антител человека.

Они очищаются от овечьей крови, а затем помечаются молекулой, например ферментом или флюоресцентным красителем, что позволяет их обнаружить.

4 Обычно для производства антител, которые связываются с аутоантителами человека, используются биологические жидкости овец и коз. Они применяются в иммунологических тестах.

Третий широко применяемый тип исследования основан на методе иммунофлюоресцен-ции. Образцы сыворотки крови пациента добавляются на тонкие срезы тканей нормальных органов на предметном стекле.

ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЙ КРАСИТЕЛЬ Через определенный период времени, необходимый для связывания аутоантител с собственными антигенами в срезе ткани, предметное стекло промывают. Наличие связанных аутоантител определяется с помощью вторичного антитела, меченного флюоресцентным красителем.

Затем стекло вновь промывают, чтобы удалить свободные вторичные антитела, и исследуют с помощью специального флуоресцентного микроскопа с целью выявления аутоантител.

Метод иммунофлюоресцен-ции позволяет одновременно помещать на предметное стекло срезы нескольких различных тканей (например, сердца, почек и щитовидной железы).

ИНДИВИДУАЛЬНЫЕ АНТИГЕНЫ За этим первоначальным скри нингом при необходимости могут последовать более

детальные тесты, например ИФА, который позволяет идентифицировать отдельные антигены.

Так, сыворотка крови, содержащая антитела, которые вступают в реакцию со всеми клеточными ядрами среза ткани (антиядерные антитела), можно проверить на наличие аутоантител против ДНК. Если антиядерные антитела присутствуют при ряде аутоиммунных заболеваний, то антитела к двунитевой ДНК более характерны, например, для системной красной волчанки (хронического воспалительного заболевания, поражающего кожу и внутренние органы).

▼ Лаборант использует имму -нофлюоресцентный световой микроскоп. Для того чтобы связать краситель с определенной клеткой или антигеном, используются антитела.

Иммунофлюоресценция