Тело человека №71, страница 16

ПАТОЛОГИЯ: Разное

Диагностическая электронная микроскопия

Диагностическая электронная микроскопия требует профессиональной интерпретации изображения. Микроскопист должен быть знаком со структурой нормальных клеточных компонентов и организацией различных клеток, образующих ткани и органы тела.

Электронная микроскопия (ЭМ) является важным диагностическим методом, особенно в таких клинических ситуациях, как вирусный гастроэнтерит, вирусные инфекции кожи, почечная патология, опухолевые процессы, нейропатология, детские болезни и паразитарные инвазии у больных СПИДом.

ХИМИЧЕСКАЯ ФИКСАЦИЯ Качество фиксации (сохранности тканей), контрастность образца и толщина среза являются важнейшими аспектами приготовления препарата для трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ).

Обычно первичную фиксацию препарата проводят с помощью

▲ Маленькая медная решетка покрыта углеродной пленкой, которая играет роль опоры для нанесенного на нее исследуемого образца.

глутаральдегида, после чего наносят вторичный фиксатор - тетра-оксид осмия, который не только фиксирует лип иды (жиры) в препарате, но и, будучи тяжелым металлом, добавляет ему контрастности. Клеточные органеллы (компоненты клеток) всех клеток человека в естественном виде прозрачны и принимают специфическую окраску только при добавлении определенных тяжелых металлов.

После химической фиксации производится дегидратация препарата этанолом и инфильтрация жидкими пластическими мономерами (смолами). После полимеризации с твердого смоляного блока, заключающего в себе образец материала, делают срезы; смола изнутри поддерживает структуру ткани.

ПОЛУЧЕНИЕ СРЕЗОВ Для получения срезов применяют специальный инструмент-ультра ми кротом - со стеклянным или алмазным лезвием. Ультратонкие срезы (толщиной около 0,00006 мм) делаются под водой, которая полностью окружает лезвие, и наносятся на поверхность медной решетки диаметром 3 мм. После этого срезы окрашиваются с помощью солей тяжелых металлов (обычно уранилацетата и лимоннокислого

свинца) для придания им контрастности.

Другой способ приготовления препарата обычно используется в вирусолоти, когда вирусные частицы в образце материала от больного (например, фекалий) частично очищаются и концентрируются в процессе ультрацентрифугации.

Вирусная взвесь затем свободно высыхает на поверхности решетки, покрытой тонким слоем пленки-подложки и окрашенной солью тяжелого металла. Краситель окружает вирус и стекает в отверстия решетки, что делает вирусные частицы более различимыми на общем фоне.

Диагностика с помощью электронной микроскопии

А Электронная микрофотография опухолевой клетки из биоп-сийного материала, полученного из быстро растущего образования на коже. Электронно-плотные гранулы (показаны стрелками) представляют собой пигментированные меланосомы. Ранняя диагностика позволяет назначить эффективное лечение и ограничить распространение опухоли. ЭМ имеет огромное значение в диагностике подобных опухолей, кроме того, она способна дифференцировать меланому, карциному и лимфому, которые могут иметь сходные черты при световой микроскопии.

А На этой микрофотографии показан тонкий срез эпителиальных клеток биоптата тонкого кишечника пациента, страдающего СПИДом. Внутри клеток с микроворсинчатым краем определяются различные стадии развития простейшего паразита (обозначены стрелками). Эти микроорганизмы являются представителями группы микроспоридий - облигатных внутриклеточных паразитов. Микроспоридии, выявляемые в данном препарате (Enterocytozoon bieneusi), вызывают у зараженных хроническую диарею.

ШМш

Приготовление препаратов перед исследованием под электронным микроско пом - длительный и трудоемкий процесс.