Тело человека №55, страница 13

ПАТОЛОГИЯ: Гематология

Сортировка клеток

РАЗДЕЛ

62

ЛИСТ 6

Различные заболевания связаны с изменениями в определенных типах клеток организма. Для их идентификации при болезни патологи используют проточный цитометр -прибор для определения клеточных характеристик.

Метод проточной цитометрии состоит в классификации клеток по параметрам, таким как способность к рассеиванию света и антигенные характеристики, и их дифференциальном подсчете.

Для этого клетки по одной пропускаются через ячейку, через которую проходит луч лазера. Измерение рассеяния света под разными углами дает информацию о размерах клетки и характеристиках ее органелл, а интенсивность флуоресценции (зависит от состава клеточной стенки и количества присоединившихся к клетке флуоресцирующих антител) позволяет определить популяционный состав образца.

Этот метод можно использовать для анализа клеток любого типа, но в клинической практике он чаще всего используется для исследования образцов крови. После настройки аппарата он может анализировать более 500 клеток в секунду.

► Контролируемый компьютером проточный цитометр может анализировать образцы крови. В клиниках эту технику используют для изучения клеточных изменений, например, при СПИДе и лейкемии.

Как работает проточный цитометр

Определение типа клеток

б й

▼ Клетки пропускаются через ячейку цитометра по одной. Они идентифицируются по способности рассеивать лазерное излучение. Эта информация используется для дифференциального подсчета клеток различных типов.

Лазер

Компьютер определяет картину рассеяния клеткой лазерного луча.

Отклоняющие пластины

Электрически заряженные пластины притягивают специфичные клеточные популяции, которые разделены на два образца.

Поток клеток

Клетки проходят через цитометр по одной.

Проточный цитометр обычно измеряет несколько параметров каждой клетки, предоставляя информацию о ее размере и характеристиках.

Возможность дифференциации клеток по типам сильно увеличивается, если она проводится по двум параметрам.

ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ

Для дальнейшей сортировки используются флуоресцентные красители, связанные с антителами, распознающими специфические белки (антигены) на поверхности клетки. Эти вещества испускают свет с различной длиной волны и могут использоваться в различных комбинациях, позволяя идентифицировать до трех антигенов для каждой клетки.

ИЗОЛИРОВАНИЕ КЛЕТОК Новейшие приборы могут выделить из образца отдельную клеточную популяцию. Частицы выходят из камеры в поток, который затем разбивается на капли, двигающиеся с равными промежутками. Капли, содержащие нужные клетки, отклоняются электрическим полем высокой напряженности и собираются в приемник.

▼ При сортировке клеток часто применяют специфические антитела с флуоресцирующей меткой. На иллюстрации разные типы клеток под флуоресцентным микроскопом выглядят зелеными или красными.